荧光显微镜的作用原理

- 2018-03-13 -

         荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源,经过滤色系统然后发出一定波长的光(比如紫外光3650入或紫蓝光4200入)作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后,再来通过目镜和物镜的放大进行观察。这样在强烈的对衬背景下,即使荧光很微弱也很容易辨认,这样敏感性高,它主要用于细胞结构和功能以及化学成分等的研究。

        荧光显微镜的基本构造是由普通光学显微镜加上一些附件(如荧光光源 、激发滤片、双色束分离器和阻断滤片等)的基础上组成的。荧光光源一般采用超高压汞灯(50一200W),它可以发出各种波长的光,但是每种荧光物质都会一个产生最强荧光的激发光波长 ,所以需加用激发滤片(一般有紫外、紫色、蓝色和绿色激发滤片),仅使一定波长的激发光透过照射到标本上,来把其他光都吸收掉。每种物质被激发光照射后,在很短时间内发射出较照射波长更长的可见荧光。

         荧光具有专一性,一般都比激发光弱,为了我们能观察到专一的荧光,在物镜后面需加阻断(或压制)滤光片。

         荧光显微镜有两个作用:第一是吸收和阻挡激发光进入目镜、以免于扰荧光和损伤眼睛,第二是选择并让特异的荧光透过,来表现出专一的荧光色彩。这两种滤光片一定要选择配合使用。

         荧光显微镜的原理是某些物质会在高强度的短波长光线照射下,会发出波长稍长的发射光。而我们一般都是观察被激发荧光基团所发射出来的波长稍长的发射光。但是激发的光会很强,所以我们就需要把激发的光全部滤去,这样才可以看到荧光基团的发射光。荧光显微镜一般都用高强度的汞灯做激发光源。使用滤色片把不需要的光滤去,只留下激发荧光集团的高强度很纯的光线。这个单色的光线通过物镜照射到样本上之后,样本会被激发出发射光,荧光和激发光都会沿着物镜光路返回,这样的话,就需要用一个二相色镜把激发光滤去,只让我们需要看到的荧光透过。这个荧光沿着显微镜的光路最后到达目镜下,然后进入我们的眼睛,我们就可以看到荧光基团所发出来的荧光了。


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